Муҳаққиқони Голландия CRISPR ва биолюминессенсияро дар як озмоиши таҷрибавӣ муттаҳид мекунандбемориҳои сироятӣ

Ба гуфтаи муҳаққиқони Нидерландия, протеини шабонаи нав таҳияшуда метавонад ташхиси бемориҳои вирусиро суръат ва соддатар кунад.
Таҳқиқоти онҳо, ки рӯзи чоршанбе дар нашрияҳои ACS нашр шудааст, як усули ҳассос ва як қадамро барои таҳлили босуръати кислотаҳои нуклеинҳои вирусӣ ва намуди зоҳирии онҳо бо истифода аз сафедаҳои дурахшони кабуд ё сабз тавсиф мекунад.
Муайян кардани микроорганизмҳо тавассути ошкор кардани изи ангуштони кислотаи нуклеини онҳо як стратегияи калидӣ дар ташхиси клиникӣ, таҳқиқоти биотиббӣ ва мониторинги амнияти ғизо ва муҳити зист мебошад.Санҷишҳои ба таври васеъ истифодашавандаи реаксияи занҷири полимеразии миқдорӣ хеле ҳассосанд, аммо омодасозии намунаи мураккаб ё тафсири натиҷаҳоро талаб мекунанд, ки онҳоро барои баъзе танзимоти соҳаи тандурустӣ ё танзимоти маҳдуди захираҳо ғайри қобили амал мегардонанд.
Ин гурӯҳ аз Нидерландия натиҷаи ҳамкории олимони донишгоҳҳо ва беморхонаҳо барои таҳияи як усули ташхиси зуд, сайёр ва ба осонӣ истифодашавандаи кислотаи нуклеинӣ мебошад, ки метавонад дар муҳитҳои гуногун татбиқ карда шавад.
Онҳо аз дурахши оташ, дурахши оташпараст ва ситораҳои хурди фитопланктонҳои обӣ илҳом гирифта шуданд, ки ҳама аз падидаи биолюминессенсӣ ба вуҷуд омадаанд.Ин эффекти дурахшанда дар торикӣ аз реаксияи химиявӣ бо иштироки протеини люцифераза ба вуҷуд омадааст.Олимон протеинҳои люциферазаро ба сенсорҳо дохил карданд, ки рӯшноӣ медиҳанд, то ҳангоми дарёфти ҳадаф ба мушоҳида мусоидат кунанд.Гарчанде ки ин ин сенсорҳоро барои муайян кардани нуқтаи нигоҳубин беҳтарин месозад, онҳо дар айни замон ҳассосияти баланд барои санҷишҳои ташхиси клиникиро надоранд.Дар ҳоле ки усули таҳрири генҳои CRISPR метавонад ин қобилиятро таъмин кунад, барои ошкор кардани сигнали заиф, ки дар намунаҳои мураккаб ва пурғавғо мавҷуд аст, қадамҳои зиёд ва таҷҳизоти махсуси махсусро талаб мекунад.
Муҳаққиқон роҳи муттаҳид кардани протеини марбут ба CRISPR бо сигнали биолюминесцентиро пайдо карданд, ки онро бо камераи оддии рақамӣ муайян кардан мумкин аст.Барои боварӣ ҳосил кардани он, ки намунаи РНК ё ДНК барои таҳлил кофӣ буд, муҳаққиқон амплификацияи рекомбиназа полимеразро (RPA) иҷро карданд, як усули оддиест, ки дар ҳарорати доимии тақрибан 100 ° F кор мекунад.Онҳо платформаи навро бо номи сенсори Люминессент кислотаи нуклеинӣ (LUNAS) таҳия карданд, ки дар он ду сафедаи CRISPR/Cas9 барои қисмҳои мухталифи геноми вирусӣ хосанд, ки ҳар кадоми онҳо як порчаи беназири люцифераза ба онҳо замима шудааст.
Вақте ки геноми мушаххаси вируси, ки муфаттишон таҳқиқ мекунанд, мавҷуд аст, ду сафедаи CRISPR/Cas9 ба пайдарпаии ҳадафи кислотаи нуклеинӣ пайваст мешаванд;онҳо дар наздикии онҳо ҷойгир шуда, имкон медиҳанд, ки сафедаи люциферазаи солим дар ҳузури субстрати кимиёвӣ ба вуҷуд ояд ва нури кабуд паҳн кунад..Барои ҳисоб кардани субстрат дар ин раванд, муҳаққиқон як реаксияи назоратро истифода бурданд, ки нури сабзро паҳн мекард.Тубуре, ки рангашро аз сабз ба кабуд табдил медиҳад, натиҷаи мусбатро нишон медиҳад.
Муҳаққиқон платформаи худро тавассути таҳияи таҳлили RPA-LUNAS, ки муайян мекунанд, озмоиш кардандРНК SARS-CoV-2бидуни изолятсияи РНК дилгиркунанда ва иҷрои ташхиси онро дар намунаҳои тампони бинии ҳалқум азКОВИД - 19беморон.RPA-LUNAS SARS-CoV-2-ро дар тӯли 20 дақиқа дар намунаҳое бо сарбории вирусии РНК то 200 нусха/мкл бомуваффақият муайян кард.
Муҳаққиқон боварӣ доранд, ки таҳлили онҳо метавонад бисёр вирусҳои дигарро ба осонӣ ва муассир ошкор кунад."RPA-LUNAS барои санҷиши бемориҳои сироятӣ дар нуқтаи нигоҳубин ҷолиб аст" навиштанд онҳо.